1、elisa的原理和实验步骤
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 操作步骤: 1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。 分钟eb。 分钟准备生物素化抗体工作液。 4．洗板5次。 分钟。 ) ℃ 放置。 7．洗板5次。 分钟。 9．开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 ．洗板5次。 ．加入显色底物(TMB)ul/孔，避光℃孵箱，避光孵育分钟。 ．加入终止液ul/孔, 混匀后即刻测量OD分钟内)。在仪器保存读数结果并印一份纸质结果。 ．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。 建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。 ELISA原理就是固定化抗原或抗体与抗体或抗原之间的免疫相互作用。基本步骤就是：包埋、封闭、竞争、洗涤、结合、洗涤、底物反应、测量分析。 太不负责任的回答了……原理课件上有。相同都是将抗原吸附于固相载体，检测抗体。不同间接的酶标抗体是二抗，与待检抗体结合；阻断酶标抗体是一抗，与抗原结合。间接中底物降解的量与抗体量相等，阻断底物降解量与抗
2、RACE技术的原理和操作方法？
RACE(rapidamplification of cDNA ends)是通过抄PCR进行cDNA末端快袭速克隆的技术。2 RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段端的方法 RACE技术的原理和操作方法： 楼主你好：RACE技术的原理和操作 近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends，RACE）是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的＇和＇ 端引入两个简并的核苷酸【＇，M=A/G/C；N=A/G/C/T】，使引物定位在poly（A）尾的起始点，从而消除了在合成第一条cDNA链时oligo（dT）与poly（A）尾的任何部位的结合所带来的影响；改进之二是在℃）有效地逆转录mRNA，从而消除了＇ 末端。所以认为，进行RACE反应应当优选SMARTTM RACE试剂盒。以下就国内目前应用最广的SMARTTM RACE试剂盒为例，简要概述RACE技术的原理和操作过程。SMARTTM ＇ 末端的DNA片段扩增出来。 race的原理 cdna末端的快速扩增，其中包括3’race和5’race两部分． 一．3’race的原理：在反转录酶的催化下，由mrna反转录成cdna,然后再用pcr扩增cdna,oligo(dt)可作为反转录引物用于cdna合成. 其步骤如下：1．以目的为模板，使用进行反转录反应合成第一条． 2．使用上游特异性引物和3’端进行反应． 3．使用限制酶对产物进行酶切反应． 4．选用适当载体克隆产物并进行测序． 二．5’race的原理及步骤：1．以目的为模板，使用端p标记的rt进行反转录，合成第一条． 2．使用rnaseh分解hybrid dnarna中rna的链． 3．使用t4rna ligase使单链cdna进行环化． 4．进行pcr扩增． race的原理 cdna末端的快速扩增，其中包括3’race和5’race两部分． 一．3’race的原理：在反转录酶的催化下，由mrna反转录成cdna,然后再用pcr扩增cdna,oligo(dt)可作为反转录引物用于cdna合成. 其步骤如下：1．以目的为模板，使用进行反转录反应合成第一条． 2．使用上游特异性引物和3’端进行反应． 3．使用限制酶对产物进行酶切反应． 4．选用适当载体克隆产物并进行测序． 二．5’race的原理及步骤：1．以目的为模板，使用端p标记的rt进行反转录，合成第一条． 2．使用rnaseh分解hybrid dnarna中rna的链． 3．使用t4rna ligase使单链cdna进行环化． 4．进行pcr扩增．
3、什么是5-race技术
RACE是获得cDNA的全长，而TAILPCR则是扩增已知片段的未知旁侧序列。前者用于获得全长cDNA，后者用于确定某一片段的位置，比如TDNA插入突变体中TDNA的插入位置。 就是末端扩增技术。包括端难度较3端大。具体方法可参考相应的试剂盒。
4、急求RACE-PCR原理！！！
多是多了点，这样好有一个全面的认识 第一 RACE的简介 目前,全长基因的获得是生物工程及分子生物学研究的一个重点。尽管已经有多种方法可以获得基因的全长序列，但在很多生物研究中，由于所研究的目的基因丰度较低，从而使得由低丰度mRNA通过转录获得全长cDNA很困难。近年来发展成熟的cDNA末端快速扩增(RACE)技术为从低丰度转录快速获得全长 cDNA提供了一个便捷的途径。 cDNA 末端快速扩增 (rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术是一种基于mRNA反转录和 PCR技术建立起来的、以部分的已知区域序列为起点,扩增基因转录本的未知区域,从而获得mRNA(cDNA)完整序列的方法。简单的说就是一种从低丰度转录本中快速增长cDNA5’和cDNA3’末端，进而获得获得全长cDNA简单而有效的方法，该方法具有快捷、方便、高效等优点,可同时获得多个转录本。因此近年来RACE技术已逐渐取代了经典的cDNA文库筛选技术,成为克隆全长cDNA序列的常用手段。 第二 RACE的原理 RACE 是采用PCR 技术由已知的部分cDNA 顺序来扩增出完整cDNAside PCR)。 3’RACE的原理 一)加入oligo(dT)和反转录酶对mRNA进行反转录得到()cDNA； 二)以oligo(dT)l amp)与少量第一链()cDNA退火并延伸，产生互补的第二链()cDNA。 三)利用3amp和接头引物进行PCR循环即可扩增得到cDNA双链。扩增的特异性取决于3amp的碱基只与目的cDNA分子互补．而用接头引物来取代dT一adaptor则可阻止长(dT)碱基引起的错配。 5’RACE的原理 ’ 端加poly(A)尾，再用锚定引物合成第二链()cDNA,接下来与3’ RACE过程相同。用接头引物和位于延伸引物上游的基因特异性引物(5amp)进行PCR扩增。 全长cDNA的获得 通过RACE方法获得的双链cDNA可用限制性内切酶酶切和uthem 印迹分析并克隆。通常的克隆方法是同时使用一个切点位于接头序列上的限制性内切酶和一个切点位于扩增区域内的内切酶。由于大多数非特异性扩增的cDNA产物不能被后一个限制性内切酶酶切，因而也就不会被克隆．从而增加了克隆的选择效率。还可以用在基因特异性引物的 ’RACE产物中获得全长cDNA。或者通过分析RACE产物的3’和5’端序列，合成相应引物来扩增mRNA的反转录产物，从而获得全长cDNA。 第三 RACE的应用 RACE技术主要是应用于对全长cDNA序列的获得，但对该技术进行一定的修改后，也可在其它方面显示出极高的应用价值。 首先，RACE技术可用于cDNA文库的构建及筛选。Belyavaasky等()用个骨髓瘤细胞分离的总RNA，通过TdT加同聚尾、(dT)引物反转录，接着用(dC)和锚定引物扩增的方法建立了一个克隆的cDNA 文库。同时，用该方法构建文库的优点是它们都只需要很少量的实验材料。建喜等()利用RACE技术从已经构建的cDNA 文库中成功克隆了家兔精子膜蛋白基因。 其次，应用RACE克隆已知片段的旁侧内部序列(neighboring internal sequence)。Fritz等()以及Struck等()分别用该法获得了’末端非编码和编码序列,省去了构建及筛选基因组文库的麻烦。王东等(KP蛋白基因的cDNA克隆。此外，RACE技术还可用于克隆同源基因的同源片断，为寻找同基因提供了一种方法。 除此之外,Whib等设计的随机引物/锚定PCR能对克隆质粒载体上的靶序列进行定点删除，采用(N)锚随机引物和变性的质粒DNA进行杂交,然后通过T个分别属于Hox,msh,NK1和NK2的含同源盒的片段，说明RACE可用于克隆同源基因的同源片段，为寻找同源基因提供了一种手段。 RACE技术与生物信息学,例如EST库相结合,具有快速,高效克隆新基因的特点,为快速钓取基因家族候选新成员提供新思路,如果一个基因是多基因家族的一个成员,用基因特异引物(GSP)*效果更高,属一种颇具规模化的方法,很有应用前景。 总之,随着RACE技术的不断改进和完善,优化PCR扩增的条件以提高扩增的效率和忠实性，RACE技术必将在基因克隆以及基因家族和基因表达变化等研究中发挥极大的作用。 第四 RACE的优点与局限性 RACE技术相对于其他方法克隆全长cDNA来说具有价廉、简单和快速等特点。用RACE获得cDNA克隆只需几天的时间，而且对丰度很低的起始反应物质，照样能迅速反馈是否有目的产物生成。因此，可根据不同的RNA制备来修订反转录条件，以满足全长cDNA的获得。同时，通过RACE技术获得5’端调控序列和多聚腺苷化信序列的信息，有助于选择引物以用于转录模型非常复杂的基因中扩增cDNA的亚群。另外，RACE技术能产生大量独立克隆，这些克隆可用来证实核苷酸序列，并使得被选择性剪接或开始用于很少使用的启动子的特殊转录物的分离成为可能。 RACE技术从理论上来说是很简单的，但是实际操作中会面临许多技术上的难题。许多研究人员发现，利用RACE来获得全长基因并非如想像中那般成功,甚至经常会发生错误的扩增和克隆结果, 多数情况下,5’端的编码区经常会由于反转录过程的不彻底而丢掉,特别是由于有大的转录物或者存在复杂的二级结构的时候,而且连接反应通常是特异性差效率很低,，而且扩增结果经常出现非特异性扩增条带,使得选择目的条带变得十分困难,而对于丰度较低,长度较长的基因RACE方法困难更大,这是困扰研究人员的一大难题。由于RACE扩增中经常出现由于引物的不匹配而导致的非特异性扩增,有时需要进行几轮巢式扩增来达到获得特异性扩增的目的,然而多轮扩增又容易提高PCR反应的错误发生率,由于这些原因,利用RACE技术通常不易获得所希望的结果。 尽管RACE技术在应用中取得了很大的成功．但在实际操作过程仍有不少局限性。一般来说导致失败的原因主要有二：第一，在逆转录、TdT加尾、PCR扩增这三个连接的酶促反应过程中，任何一步的失败都会导致前功尽弃；第二，即便是上述反应平稳顺利．但结果也通常会出现一些非特异性产物或非全长的产物。因此，要保证RACE技术的顺利进行，还需从不同方面进行改良优化。
5、RACE 中通用引物UPM的具体作用是什么？主要他的反应机制和原理。请高手指点！
UPM通用引物上的部分序列与合成RACE第一链时加上SMART寡核营酸序列通用接头引物的SMART寡核营酸序列互补。 SMARTTM 3RACE的原理 利用mRNA的3末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点，以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo（dT）（gene specific primer，GSP）作为上游引物，用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为下游引物，以cDNA第一链为模板，进行PCR循环，把目的基因3 末端的DNA片段扩增出来。 SMARTTM 5RACE的原理 先利用mRNA的末端时自动加上 ）。然后用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer，UPM）作为上游引物，用一个基因特异引物末端的cDNA片段扩增出来。最终，从RACE产物中获得全长cDNA，或者通过分析RACE产物的3和5端序列，合成相应引物扩增出全长cDNA。
6、生物实验中的RACE是什么技术
RACE 是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术,通过往两端延伸扩增,获得cDNA完整的3端或5端 搜一下：生物实验中的RACE是什么技术
